標記細胞株要如何保存？

　　細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。原代培養物經傳代成功后即為細胞系，由原先存在于原代培養物中的細胞世系所組成。如果不能繼續傳代，或傳代次數有限，可稱為有限細胞系，如可以連續培養，則稱為連續細胞系，培養50代以上并無限培養下去。所以細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得的具有特殊性質或標志的培養細胞。從培養代數來講，可培養到40-50代。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。對于人類腫瘤細胞，在體外培養半年以上，生長穩定，并連續傳代的即可稱為連續性株或系。

　　
 

　　標記細胞株是在細胞系中穩轉特定的標簽（LUC、GFP、RFP等），此細胞株可以作為示蹤工具細胞，為細胞成像以及活體成像提供便利。細胞株要如何存儲？

　　

　　1、紫外消毒30min后關閉紫外燈，開啟超凈臺正常工作狀態，用酒精消毒操作者的雙手。

　　

　　2、將所需的培養基，胰酶確保瓶身干凈后放于工作臺面內，點燃酒精燈，將培養基和胰酶瓶口用酒精棉球擦拭后，再將瓶口對準在酒精燈上消毒2-3次，旋開瓶蓋后再次分別消毒瓶口和瓶蓋，分別放于酒精燈的兩側。特別是將培養基瓶放于斜架上，瓶口對準酒精燈，且放在距離酒精燈zui近的位置，瓶蓋置于酒精燈的另一側。

　　

　　3、將培養瓶瓶口在酒精燈上消毒2-3次，旋開后分別再次消毒瓶口和瓶蓋2-3次，蓋放于酒精燈右側后將培養瓶內的培養液懸空倒進污缸，在酒精燈消毒2-3次瓶口，豎直放好。取1ml移液器快速移動在酒精燈上消毒1-2次，然后再裝上槍頭吸取1.5ml胰酶液，懸空移入培養瓶內。

　　

　　4、將培養使胰酶浸沒整個瓶壁的細胞層，計時約40s，立馬豎起對著燈光可觀察到細胞與細胞之間有針孔樣縫隙，并有1-2個細胞脫落，這時為胰酶消化的時機。若看到成片的細胞從瓶壁脫落為胰酶消化過度；若看不到針孔樣縫隙和細胞脫落，則需繼續消化，輕輕的迅速平放培養瓶使胰酶浸沒細胞層1s后迅速豎起對著燈光觀察細胞情況，可反復幾次，直至出現針孔樣縫隙和1-2個細胞脫落的消化狀態，用移液器將胰酶吸凈。

　　

　　5、吸取1ml細胞凍存液于培養瓶內，并用移液器吸取少量的培養基輕柔的反復沖洗培養瓶壁5-8次，使貼壁細胞*脫落于培養基內再輕輕吹打2-3次，使細胞盡可能處于單個懸浮狀態。

　　

　　6、將1ml含有標記細胞株的凍存液移入新的保種管內，擰緊瓶蓋，做好實驗標記。

　　

　　7、將培養基瓶口和瓶蓋消毒2-3次后擰緊，熄滅酒精燈，整理實驗臺面，取出實驗試劑及污缸等，關閉超凈工作臺。

　　

　　8、將保種管先放于4℃冰箱30min后拿出放置-20℃冰箱過，次日再放于-80℃的冰箱內3-4天，存放于-196℃的液氮灌內長期保存。