原代心肌細胞間的培養(yǎng)都有哪些抗污染措施？

　　成纖維細胞比心肌細胞更容易貼壁，具有分裂增殖能力。差異貼壁后，原代心肌細胞間中仍有少數(shù)成纖維細胞混雜，如果處理不當，很容易長成優(yōu)勢細胞。溴脫氧尿苷(BrdU)可以干擾細胞有絲分裂，因此BrdU常規(guī)用于抑制成纖維細胞的生長。但如果用胎牛血清培養(yǎng)細胞，由于胎牛血清含有很多促有絲分裂因子，BrdU很難抑制成纖維細胞的生長。使用小牛血清可以克服這種現(xiàn)象，獲得90%以上的心肌細胞。

　　

　　觀察原代心肌細胞間形態(tài)時，接種密度低，貼壁心肌細胞數(shù)量減少。為了防止存活的心肌細胞隨著液體的更換而被丟棄，液體的更換應在接種48小時后進行。這不僅會顯著增加貼壁心肌細胞的數(shù)量，還會使BrdU需要更長的時間來抑制成纖維細胞。另外，其和0.1gL1BSA能為心肌細胞提供營養(yǎng)支持，但對心肌細胞的黏附率和凋亡率無明顯影響。

　　

　　除無菌操作等常規(guī)技術方法外，還應特別注意以下幾點：獲取心臟時，避免切開消化道。比較安全的方法是切開劍突上肋，不涉及腹腔，減少污染機會。在條件允許的情況下，避免新生大鼠心肌細胞與其他細胞在同一培養(yǎng)箱中共培養(yǎng)，防止交叉污染。培養(yǎng)心肌細胞的觀察。

　　

　　原代心肌細胞間培養(yǎng)液適宜的pH范圍為7.2~7.4。配制和使用培養(yǎng)基時，應注意：

　　

　　1、過濾后pH值會增加0.1~0.3。

　　

　　2、培養(yǎng)基中加入血清后，pH值會降低，降低的程度與血清的質(zhì)量和含量有關。

　　

　　3、及時更換液體。

　　

　　4、配制好的培養(yǎng)液不宜在4℃下長期保存。這是因為培養(yǎng)液中的CO2會溢出，培養(yǎng)液的pH會升高。每種配制好的培養(yǎng)液應盡可能在2周內(nèi)用完，否則應部分保存在-20℃下。使用前要補充谷氨酰胺和碳酸氫鈉，再次過濾后才能使用。